Гистологические методы исследования костной ткани

(PDF) Модификация методики гистологического исследования костной ткани [Modification of method of histological investigation of bone tissue]

Гистологические методы исследования костной ткани

__________________________________________________________________________________

МОРФОЛОГІЯ • 2010 • Том ІV • №3

73

ются такие фиксаторы, как 70% этанол или 10%

формалин (при рН=7,0). После обезвоживания

образцы кости подвергаются заливке мономер-

ными пластмассами, как правило, метилметакри-

латом, что придает получаемым блокам проч-

ность, аналогичную прочности кости. На сле-

дующем этапе с использованием специальных

микротомов, оснащенных алмазным ножом, при-

готавливают срезы толщиной 1-2 мкм. В некото-

рых лабораториях перед окрашиванием срезов

пластмассу растворяют, в других – этого не де-

лают, желая сохранить архитектонику среза. В

последующем производят окраску срезов. При

выборе процедуры окраски обязательным усло-

вием является использование такого метода, ко-

торый обеспечивает однозначную идентифика-

цию остеоида и клеток костной ткани. Наиболее

часто применяют метод Косса, окраску 1% рас-

твором солохромцианина R или трихромом

Гольднера. Детальное описание этих методик

приводится в соответствующих руководствах

(Ромейс Б., 1953, Саркисов Д.С., Перов Ю.Л.,

1996, An Y.H., Martin K.L., 2003, Helfrich M.H.,

Ralston S.H., 2003, Khurana J.S., 2009).

Следует отметить, что вышеупомянутые

способы заливки, получения срезов и их окраски

требуют наличия специального дорогостоящего

оборудования и реактивов, а также отличаются

сложностью и длительностью процедуры. В свя-

зи с чем этот метод практически не находит

применения в Украине.

Нами разработана методика получения не-

декальцинированных срезов костной ткани крыс

линии Вистар и их последующей окраски для

изучения статических гистоморфометрических

параметров, которая позволяет избежать этих

неудобств. Методика основана на общеизвест-

ных процедурах (Ромейс Б., 1953, Уикли Б.С.,

1975, Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996, Пикалюк

В.С., 2007), но в таком сочетании ранее не при-

менявшихся.

Вначале кусочки костной ткани фиксируют

в 70% этиловом спирте в течение суток. Учиты-

вая тот факт, что при помощи этой же методики

возможно изучение динамических гистоморфо-

метрических параметров (с предварительным

двойным введением животным тетрациклина),

формалин менее приемлем, так как в сравнении

со спиртом, приводит к большему вымыванию

тетрациклиновых меток.

После чего производят обезвоживание мате-

риала и его заливку в эпоксидную смолу по сле-

дующей схеме:

1. Поместить в 70% этанол на 2 часа.

2. Поместить в 96% этанол 2 раза по 25 ми-

нут.

3. Промыть в 100% ацетоне 2 раза по 15 ми-

нут (в закрытых банках).

4. Залить в смесь ацетон-смола в соотноше-

нии 1:1 на 1 час (в закрытых банках). Смола го-

товится следующим образом: смешиваются 9,2

мл эпона-812, 5,7 мл отвердителя ДДСА и 5,1 мл

уплотнителя МНА. Полученная смесь постоянно

мешается в течение 1 часа, затем к ней по каплям

добавляют ускоритель ДМР-30 (14 капель).

5. Залить смолой непосредственно в жела-

тиновых капсулах.

6. Полимеризовать капсулы в термостате

при температуре 37°С – 12 часов, затем при тем-

пературе 45°С – 12 часов, затем при температуре

56°С – 12 часов.

Срезы толщиной 1-2 мкм изготавливают на

ультрамикротоме «ULTRACUT» с использова-

нием как алмазного, так и стеклянных ножей.

Необходимо отметить, что качество срезов, по-

лученных при помощи стеклянных ножей, было

хуже, но, вполне достаточное для последующей

морфометрии.

Полученные полутонкие срезы окрашивают

по методу Косса с последующим контрастным

окрашиванием. В отличие от окраски солохром-

цианином R и трихромом Гольднера, этот метод

отличается простотой выполнения и доступно-

стью реактивов. Метод Косса является классиче-

ским референтным методом выявления кальция в

тканях. При этом костный минерал окрашивается

в черный цвет вследствие отложения серебра, а

остеоид остается восприимчивым к контрастно-

му окрашиванию.

Методика окраски

1. Срезы помещают в 1% водный раствор

нитрата серебра и освещают с помощью сильно-

го источника света (лучше всего использовать

солнечный свет) в течение 2-15 минут (длитель-

ность может колебаться в зависимости от интен-

сивности освещения и свежести раствора).

2. Промывают в трех сменах дистиллиро-

ванной воды.

3. Обрабатывают 2,5% тиосульфата натрия

2-3 минуты.

4. Хорошо промывают в дистиллированной

воде.

На последующих этапах производили окра-

шивание клеток и остеоида.

5. Окрашивают 1% раствором метиленового

синего 30-60 секунд. Методика приготовления

1% раствора метиленового синего: вначале гото-

вится насыщенный водный раствор, который

смешивается с 90% этанолом в соотношении 1:1.

Затем из этого маточного раствора готовится 1%

водный раствор метиленового синего.

6. Промывают в проточной воде.

7. Окрашивают 0,05% основного фуксина на

2,5% этаноле 30 секунд.

8. Промывают в проточной воде.

Результат: минерализованная ткань – корич-

нево-черная в виде грубых гранул, остеоид – ро-

зово-красный, ядра клеток – фиолетово-синие.

Ход окрашивания необходимо контролиро-

вать при помощи микроскопа.

Источник: https://www.researchgate.net/publication/279515081_Modifikacia_metodiki_gistologiceskogo_issledovania_kostnoj_tkani_Modification_of_method_of_histological_investigation_of_bone_tissue

Гистологическое исследование: 5 способов взятия пробы, популярные области применения

Гистологические методы исследования костной ткани

Нельзя преуменьшить роль гистологии в современной медицине. Особенно в диагностике злокачественных новообразований (рак), ведь правильно установленный диагноз (правильно установленный вид опухоли) — это уже 50% успеха в лечении.

Гистологические исследования применяются практически всеми врачами различных специальностей (гинекологи, онкологи, патологоанатомы, гастроэнтерологи, хирурги, урологи и т.д.).

Анализ на гистологию назначить может любой доктор, к которому Вы попали на приём. Для чего назначается такой анализ? Конечно же, анализ на гистологию назначается не всем и не во всех случаях, для этого должны быть определённые показания.

Если, например, исследования (рентгенограмма, УЗИ, КТ, МРТ и т.д.) не дают точного ответа на поставленные врачом вопросы и невозможно поставить точный диагноз. А без точного диагноза навряд ли получится качественное лечение Вашего заболевания.

Суть гистологического исследования – верно поставленный диагноз! В России гистологический метод можно назвать золотым стандартом в диагностике!

Анализ на гистологию поможет дифференцировать диагноз в непонятных ситуациях. Не редки случаи, когда не совсем понятно, что за процесс происходит в органе (ткани).

Некоторые заболевания схожи друг с другом по своим проявлениям и клиническому течению. Например, округлое образование в лёгком может быть и опухолью и туберкулёмой и т.д.

Когда врач не может сказать со стопроцентной точностью что это, то, конечно же, необходимо гистологическое исследование.

Бывают ситуации, что и при оперативных вмешательствах хирурги обнаруживают какие-либо образования, которые также отправляют на гистологические исследования.

Материалы для гистологического исследования — это ткани органов, либо целые органы (при оперативном удалении). Получают ткани органов путём инвазивной процедуры – биопсии (отщипывание небольшого кусочка). Кусочек органа (ткани) в этом случае называется биоптат.

При заборе материала для исследований пользуются принципом – забор наиболее изменённых участков органа. Перед тем как приступить к самой биопсии могут быть проведены другие дополнительные исследования (КТ, МРТ, УЗИ, эндоскопические исследования и т.д.).

Какими методами можно получить биопсийный материал?

  • Во время хирургической операции (часть поражённого органа или весь удалённый орган);
  • во время эндоскопического исследования (на эндоскопе крепятся специальные щипчики, которыми, собственно, и добывают материал при исследовании);
  • пункция толстой иглой (пункционная биопсия) – забор делается через кожу у близко лежащих органов, например, можно получить ткань печени;
  • отсасывание материала маленькой трубочкой (аспирационная биопсия) – таким образом, получают материал из щитовидной железы, полости матки;
  • также используются методы соскоба и мазков в основном в гинекологии.

Техника выполнения

Любой гистологический препарат изучается под микроскопом световым или электронным, это зависит от оснащённости лаборатории. Но в основном, конечно, изучается препарат (биоптат) под световым микроскопом.

Изучает и даёт заключение врач-гистолог или патологоанатом (патологоанатом — это не только работник морга, врачи этой специальности обязательно владеют техникой микроскопического исследования препарата!). Подготавливают препараты к исследованию лаборанты.

Чтобы гистологически исследовать ткань, нужны особые приготовления.

  1. Самое первое, что происходит – это забор материала (биоптата), изначально кусочек органа должен быть помещён в специальный раствор (формалина или спирта), это делается для фиксации ткани и для предотвращения различных гнилостных процессов.
  2. Затем биоптат заливают парафином (получатся плотный квадратик).
  3. Следующее – на специальном аппарате делают тонкие срезы, чтобы слои клеток не накладывались друг на друга, это улучшает качество препарата.
  4. Окрашивание препаратов. Для того чтобы изучить различные структуры или изменённые клетки, используются специальные красители.
  5. Ну и, в конце концов, для того чтобы препарат сохранялся дольше, происходит его дальнейшая специальная обработка.

Врач–гистолог получает материал и начинает он с описания макроскопической картины. То есть в начале он описывает внешний вид (цвет, плотность, видимые изменения поступившего к нему органа или кусочка ткани).

Затем препарат готовится (информация об этом представлена выше) и изучается уже непосредственно под микроскопом. Изучается микроскопическая картина, которой врач-гистолог даёт описание и в конце ставит диагноз.

В направлении на гистологию лечащим врачом часто указывается предварительный диагноз или диагноз под вопросом, который, собственно, может подтвердиться или нет.

Бывают ли ошибки в результатах гистологии?

К сожалению, ошибки, бывают везде! Поэтому исследование иногда проводится несколько раз. Дело не всегда в недобросовестном отношении врача, бывают ситуации, когда забор материала изначально сделан неправильно. Поэтому биоматериал следует брать точно из изменённой ткани (участков органа).

Также и в лаборатории неправильная подготовка материала для исследования, плохое оснащение и истёкший срок годности реактивов могут повлиять на результат.

Поэтому все этапы от забора материала и до изучения врачом-гистологом должны соблюдаться с особой точность и аккуратностью.

Гистологические исследования назначаются практически всеми врачами. Но наиболее распространён этот метод в онкологии. В онкологических диспансерах имеется специальное отделение патологической анатомии, куда и отправляются материалы, где выставляется точный диагноз.

Для онкологических больных наиболее важен этот метод исследования, во-первых для того, чтобы ответить на вопрос — какая это опухоль, доброкачественная или злокачественная, а во-вторых, для отслеживания динамики лечения.

В гинекологии используют такие методы забора материала, как мазки, кюретаж (выскабливание), исследование целого или части органа. Большой процент заболеваний женской половой системы подразумевает сам собой направление некоторых материалов на гистологию.

При подозрении на какие заболевания могут отправить материал на гистологию? Это:

  • рак матки (шейки или тела);
  • рак яичников;
  • рак молочных желёз;
  • дисплазия матки;
  • эрозии;
  • аборт и т.д.

Это далеко не все заболевания, а лишь малое их количество. В последнее время рост заболеваний среди женщин (именно женская патология) увеличивается, особенно онкологических.

Гастроэнтерология

В гастроэнтерологии чаще всего взятие исследуемого материала происходит при эндоскопическом исследовании (ФГДС), то есть можно оценить и внешний вид изменённого участка и плюс ко всему взять биоптат. Таким образом определяется гастрит, язвы, опухоли, в биоптате также можно определить возбудителя язвенной болезни – бактерию хеликобактер пилори (гистохимическое исследование).

Следует помнить о том, что язвенная болезнь и эрозивные гастриты — это предраковые состояния, поэтому таким пациентам следует хотя бы раз в год проходить обследование (эндоскопическое) своего желудочно–кишечного тракта.

Онкология

Повторюсь ещё раз — это самая обширная группа заболеваний (онкологические заболевания), которая требуют именно этого метода исследования. Диагноз, который подтверждён гистологически, называется верифицированный диагноз.

Почему именно при онкологических заболеваниях обязательно отправляют материал для исследования? Существует великое множество различных видов опухолей, которые могут быть похожи друг на друга макроскопически, но при детальном микроскопическом исследовании различаться. Лечение той или иной опухоли зависит от её строения и вида ткани, из которой она происходит, поэтому точное определение диагноза очень важно в этом случае.

Гистологические исследования широко используются в эндокринологии (исследования щитовидной железы), особенно при аутоиммунных её поражениях, когда анализы гормонов не дают полную и точную картину.

Исследование предстательной железы также широко распространено, это связано с частыми заболеваниями у мужчин после 40 лет.

Гистологический анализ также важен в гематологии, он используется как для определения опухолевых процессов (лейкозы хронические и острые), так и для установления характера анемии (например В12-дефицитная анемия, используется пункция костного мозга).

Перечислять можно бесконечно. Проще говоря, любой орган и ткань могут быть подвержены гистологическому анализу. Так как каждая ткань имеет определённое строение и определённые клетки в своём составе, при наличии изменений черты строения меняются и уже можно заподозрить патологию.

Расценки на гистологическое исследование

В коммерческих лабораториях цены примерно одинаковые, в общий чек входит забор материала (биоптата) плюс само исследование. В общем, цена варьирует в общей сложности от 1500 рублей до 25 000 – 30000 рублей. Результаты анализов можно получить в течение 5 – 7 дней.

Гистологические исследования проводятся и бесплатно, в онкологических диспансерах, гинекологических и т.д. Всё зависит от лечебного учреждения, в котором вы находитесь.

Гистологическое исследование, а именно забор биопсийного материала проводится чаще всего под контролем УЗИ, поэтому не стоит бояться идти на такую процедуру.

Важно понять, что такое исследование в некоторых случаях является необходимостью! Помните, что залог успеха в лечении – правильно поставленный диагноз, для постановки которого как раз и используется гистологическое исследование.

Литература

  1. Гистология, цитология, эмбриология, Афанасьев, 2002 г, 744 с.
  2. В. В. Давыдов, М. М. Лапкин, В. О. Самойлов, В. А. Черешнев, МОРФОЛОГИЯ ТКАНЕЙ.
  3. А. Г.

    Гунин, Электронный атлас микрофотографий по гистологии.

  4. Ю. В. Каминский, В. С. Тимошенко, О. Г. Полушин УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКОЕ ПОСОБИЕ по патологической анатомии и биопсийно-секционному курсу.

Оценка статьи

Мы приложили много усилий, чтобы Вы смогли прочитать эту статью, и будем рады Вашему отзыву в виде оценки. Автору будет приятно видеть, что Вам был интересен этот материал. Спасибо!

(5 5,00 из 5)
Загрузка…

Если Вам понравилась статья, поделитесь ею с друзьями!

Вам будет интересно

Источник: https://UstamiVrachey.ru/analizy/gistologicheskoe-issledovanie

Лечение Костей
Добавить комментарий